蛋白質(zhì)/多肽《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0541電泳法第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，蛋白質(zhì)/多肽標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)--天天狠狠
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在《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0541中，電泳法被明確為一種用于分離、分析和鑒定蛋白質(zhì)/多肽等生物大分子的技術(shù)，其標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法涵蓋多種電泳技術(shù)，以下是對(duì)蛋白質(zhì)/多肽電泳法標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的詳細(xì)歸納：
電泳法一般可分為兩大類：
自由溶液電泳或移動(dòng)界面電泳：不含支持物的電泳，溶質(zhì)在自由溶液中泳動(dòng)，適用于高分子的檢測(cè)。
區(qū)帶電泳：含有支持介質(zhì)的電泳，帶電荷的供試品（如蛋白質(zhì)、核苷酸等大分子或其他粒子）在惰性支持介質(zhì)（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，在電場(chǎng)的作用下，向其極性相反的電極方向按各自的速度進(jìn)行泳動(dòng)，使組分分離成狹窄的區(qū)帶。
區(qū)帶電泳法可選用不同的支持介質(zhì)，以下是一些常用的技術(shù)：
紙電泳法：
儀器裝置：包括電泳室及直流電源，常用的水平式電泳室裝置包括兩個(gè)電泳槽和一個(gè)可以密封的玻璃板蓋，兩側(cè)的電泳槽均用有機(jī)玻璃板分成兩部分，外格裝有鉑電極，里格為可放濾紙的有機(jī)玻璃電泳槽架。
試劑：電泳緩沖液（如枸櫞酸鹽緩沖液）需按《中國(guó)藥典》規(guī)定配制。
操作方法：包括紙的處理、點(diǎn)樣、電泳、含量測(cè)定等步驟。
醋酸纖維素薄膜電泳法：
儀器裝置：與紙電泳法相同。
試劑：包括巴比妥緩沖液、染色液、脫色液等，需按《中國(guó)藥典》規(guī)定配制。
操作方法：包括醋酸纖維素薄膜的預(yù)處理、點(diǎn)樣與電泳、染色、透明、含量測(cè)定等步驟。
瓊脂糖凝膠電泳法：
儀器裝置：與紙電泳法相同。
試劑：包括醋酸-鋰鹽緩沖液、胺藍(lán)溶液等，需按《中國(guó)藥典》規(guī)定配制。
操作方法：包括制膠、點(diǎn)樣與電泳、染色與脫色等步驟。瓊脂糖凝膠電泳法具有分子篩作用，適用于核酸、核蛋白等的分離、鑒定與純化。
聚丙烯酰胺凝膠電泳法：
儀器裝置：通常由穩(wěn)流電泳儀和圓盤(pán)電泳槽或平板電泳槽組成。
試劑：包括丙烯酰胺單體、交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺、催化劑等，需按《中國(guó)藥典》規(guī)定配制。
操作方法：包括制膠、點(diǎn)樣與電泳、染色與脫色等步驟。聚丙烯酰胺凝膠電泳法可根據(jù)儀器裝置的不同分為水平平板電泳、垂直平板電泳和盤(pán)狀電泳，適用于研究生物大分子的特性，如電荷、分子量、等電點(diǎn)等。
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法：
原理：根據(jù)大多數(shù)蛋白質(zhì)都能與陰離子表面活性劑十二烷基鈉（SDS）按重量比結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子所帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)天然蛋白質(zhì)分子的凈電荷，消除了不同蛋白質(zhì)分子的電荷效應(yīng)，使蛋白質(zhì)按分子大小分離。
儀器裝置：恒壓或恒流電源、垂直板電泳槽和制膠模具。
試劑：包括分離膠緩沖液、濃縮膠緩沖液、電極緩沖液等，需按《中國(guó)藥典》規(guī)定配制。
操作方法：包括凝膠制備、供試品溶液制備、電泳、染色與脫色等步驟。本法適用于蛋白質(zhì)的定性鑒別、純度和雜質(zhì)控制以及定量測(cè)定。
系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：照高效液相色譜法（通則0512）項(xiàng)下相應(yīng)的規(guī)定進(jìn)行，以確保電泳系統(tǒng)的分離效能、重復(fù)性等符合要求。
結(jié)果判斷：根據(jù)供試品與對(duì)照品的色帶位置和色澤深淺程度進(jìn)行判斷。對(duì)于蛋白質(zhì)/多肽的定性鑒別，供試品主成分遷移距離應(yīng)與對(duì)照品一致；對(duì)于定量測(cè)定，可采用洗脫法或掃描法測(cè)定各蛋白質(zhì)組分的相對(duì)含量。
第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu) , 標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè) , 國(guó)標(biāo)檢測(cè) , 檢測(cè) , 檢測(cè)中心
第三方檢測(cè)技術(shù)服務(wù)，涂料檢測(cè)服務(wù)，環(huán)境生態(tài)監(jiān)測(cè)，計(jì)量檢測(cè)服務(wù)
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