蛋白質(zhì)/多肽《中國藥典》2015年版四部通則3405肽圖檢查法（第一法）標(biāo)準(zhǔn)檢測介紹如下：

一、檢測原理

肽圖檢查法是通過特定的化學(xué)試劑或酶，特異性地將蛋白質(zhì)裂解為肽段，再采用可靠的方法（如高效液相色譜法）分離和鑒定這些肽段，然后將所得的肽段圖譜與經(jīng)同法處理的對照品圖譜進行對比，從而判定結(jié)果。

二、檢測目的

肽圖檢查法主要用于蛋白質(zhì)藥物的鑒別試驗，評價生產(chǎn)工藝的批間一致性和生產(chǎn)用細胞基質(zhì)表達的穩(wěn)定性。此外，還可用于蛋白變異體的定性分析、二硫鍵定位、糖基化位點分析、蛋白修飾位點確定等。

三、檢測方法（第一法：胰蛋白酶裂解-反相高效液相色譜法）

1. 色譜條件：

2. 色譜柱：以蛋白質(zhì)與多肽分析用辛烷基硅烷鍵合硅膠或十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

3. 柱溫：30℃±5℃。

4. 對照品與供試品保存溫度：2～8℃。

5. 流動相A液：0.1%三氟乙酸的水溶液。

6. 流動相B液：0.1%三氟乙酸的乙腈溶液。

7. 流速：每分鐘1ml。

8. 梯度洗脫：70分鐘（A液從～30%，B液從0～70%）。

9. 檢測波長：214nm。

10. 檢查法：

11. 取供試品溶液及對照品溶液（均為每1ml中含1mg的溶液，如供試品和對照品濃度不夠，則應(yīng)濃縮至相應(yīng)的濃度），分別用1%碳酸氫銨溶液充分透析。

12. 按1:50（mg/mg）加入胰蛋白酶溶液（取磺酰苯丙氨酰氯甲酮處理過的或序列分析純胰蛋白酶適量，加1%碳酸氫銨溶液溶解，制成每1ml中含0.1mg的溶液）到供試品溶液與對照品溶液中。

13. 于37℃保溫16～24小時后，按1:10加入50%醋酸溶液。

14. 以每分鐘10000轉(zhuǎn)離心5分鐘（或用0.45μm濾膜濾過）。

15. 精密量取上清液100μl，分別注入液相色譜儀，梯度洗脫，記錄色譜圖。

16. 結(jié)果判定：

17. 將供試品溶液的圖譜與對照品溶液的圖譜進行比較。

18. 供試品的肽圖譜應(yīng)與對照品圖譜一致，包括特征肽段的保留時間、峰面積比例等參數(shù)。