GB 4789.7-2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)》規(guī)定了食品中副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus）的檢驗(yàn)方法，適用于各類食品中副溶血性弧菌的定性及定量檢測。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的核心內(nèi)容：

一、適用范圍

適用于食品中副溶血性弧菌的檢驗(yàn)，包括生鮮、冷凍、即食海產(chǎn)品及其加工制品，也可擴(kuò)展至加工環(huán)境樣品（如設(shè)備表面涂抹樣、水體樣本）及臨床腹瀉樣本。

二、生物學(xué)特性

形態(tài)：革蘭氏陰性桿菌，多形態(tài)（弧狀、逗點(diǎn)狀、球狀、絲狀、桿狀等），無芽孢，單端單鞭毛。

培養(yǎng)特性：嗜鹽性，在3%~7%氯化鈉濃度中生長旺盛，Zui適生長溫度為30~37℃，Zui適pH為7.4~8.0。

致病性：產(chǎn)生耐熱直接溶血素（TDH）和耐熱相關(guān)溶血素（TRH），引發(fā)胃腸炎，癥狀包括惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛等。

三、檢驗(yàn)程序

樣品采集與制備：

魚類和頭足類：表面組織、腸或鰓。

貝類：全部內(nèi)容物（貝肉和體液）。

甲殼類：整個動物或中心部分（腸和鰓）。

非冷凍樣品：采集后立即置于7~10℃冰箱保存，盡早檢驗(yàn)。

冷凍樣品：在45℃以下解凍不超過15分鐘，或在2~5℃解凍不超過18小時。

取樣部位：

勻液制備：稱取25g（mL）樣品，加入225mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水，均質(zhì)或拍擊制成1:10勻液。

增菌：

制備10倍系列稀釋勻液。

選擇3個適宜稀釋度，每個稀釋度接種3支含9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種1mL，36℃±1℃培養(yǎng)8~18小時。

定性檢測：將1:10勻液于36℃±1℃培養(yǎng)8~18小時。

定量檢測：

分離：

TCBS瓊脂：圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，直徑2~3mm，有類似口香糖的質(zhì)感。

弧菌顯色培養(yǎng)基：副溶血性弧菌呈藍(lán)綠色（具體顏色依產(chǎn)品說明）。

取增菌液劃線接種于TCBS瓊脂或弧菌顯色培養(yǎng)基平板，36℃±1℃培養(yǎng)18~24小時。

典型菌落特征：

純培養(yǎng)：

挑取3個或以上可疑菌落，劃線接種于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)18~24小時。

初步鑒定：

氧化酶試驗(yàn)：副溶血性弧菌為陽性。

革蘭氏染色：革蘭氏陰性，多形態(tài)，無芽孢，有鞭毛。

3%氯化鈉三糖鐵瓊脂試驗(yàn)：底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，有動力。

嗜鹽性試驗(yàn)：在6%和8%氯化鈉濃度中生長旺盛，在0%和10%中不生長或微弱生長。

確定鑒定：

生化試驗(yàn)：使用生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)，檢測甘露醇、賴氨酸脫羧酶、MR-VP等反應(yīng)。

毒力基因檢測（可選）：通過PCR檢測耐熱直接溶血素基因（tdh）和耐熱相關(guān)溶血素基因（trh）。

四、結(jié)果報告

定性結(jié)果：報告樣品中是否檢出副溶血性弧菌。

定量結(jié)果：以MPN/g（mL）或CFU/g（mL）報告菌落數(shù)，結(jié)合限量標(biāo)準(zhǔn)判定是否合格。

五、關(guān)鍵控制點(diǎn)

樣品處理：避免交叉污染，嚴(yán)格無菌操作。

培養(yǎng)條件：TCBS瓊脂需現(xiàn)用現(xiàn)配，避免蔗糖分解影響結(jié)果。

菌落挑?。簭呐囵B(yǎng)箱取出TCBS平板后，應(yīng)盡快（不超過1小時）挑取菌落。

生化鑒定：結(jié)合多項生化反應(yīng)綜合判斷，避免單一試驗(yàn)誤判。

六、應(yīng)用意義

食品安全監(jiān)管：評估海產(chǎn)品衛(wèi)生狀況，預(yù)防副溶血性弧菌食物中毒。

風(fēng)險監(jiān)測：跟蹤副溶血性弧菌污染趨勢，為防控措施提供依據(jù)。

出口檢驗(yàn)：符合（如ISO 21872-1），保障食品國際貿(mào)易合規(guī)性。