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食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗 GB 4789.36-2016標(biāo)準(zhǔn)檢測-國產(chǎn)精品歐美一區(qū)|飄花電影院午夜倫天堂

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GB 4789.36-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗》規(guī)定了食品中大腸埃希氏菌O157:H7/NM的檢驗方法,以下是對該標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)解讀:

一、適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中大腸埃希氏菌O157:H7/NM的檢驗,包括定性檢驗和定量檢驗(如平板計數(shù)法、MPN計數(shù)法)。

二、檢驗方法

1. 定性檢驗(常規(guī)培養(yǎng)法)
  • 增菌:以無菌操作取檢樣25g(或25mL)加入到含有225mL改良EC肉湯(mEC+n)的均質(zhì)袋中,均質(zhì)后于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。

  • 分離:取增菌后的mEC+n肉湯,劃線接種于改良山梨醇麥康凱瓊脂(CT-SMAC)平板和大腸埃希氏菌O157顯色瓊脂平板上,36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h,觀察菌落形態(tài)。

  • 在CT-SMAC平板上,大腸埃希氏菌O157:H7/NM通常為圓形、光滑、較小的無色菌落,中心呈灰褐色。

  • 在大腸埃希氏菌O157顯色瓊脂平板上,菌落特征按產(chǎn)品說明書進(jìn)行判定。

  • 初步生化試驗:挑取可疑菌落,分別接種三糖鐵瓊脂(TSI)和月桂基鹽胰蛋白胨肉湯-MUG(MUG-LST),于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。

  • 在TSI瓊脂中,典型菌株為斜面與底層均呈黃色,產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣,不產(chǎn)生硫化氫(H2S)。

  • 將MUG-LST肉湯管置于長波紫外燈下觀察,MUG試驗陽性的大腸埃希氏菌株應(yīng)有熒光產(chǎn)生,MUG試驗陰性的應(yīng)無熒光產(chǎn)生,大腸埃希氏菌O157:H7/NM為MUG試驗陰性,無熒光。

  • 鑒定:

  • 血清學(xué)試驗:在營養(yǎng)瓊脂平板上挑取分純的菌落,用O157和H7診斷血清或O157乳膠凝集試劑作玻片凝集試驗。對于H7因子血清不凝集者,應(yīng)穿刺接種半固體瓊脂,檢查動力,經(jīng)連續(xù)傳代3次,動力試驗均陰性,確定為無動力菌株。

  • 生化試驗:從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取菌落,進(jìn)行生化試驗,如靛基質(zhì)、甲基紅-伏普試驗(MR-VP)、氧化酶、西蒙氏檸檬酸鹽、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶、纖維二糖發(fā)酵、棉子糖發(fā)酵等試驗。

  • 毒力基因測定(可選項目):樣品中檢出大腸埃希氏菌O157:H7或O157:NM時,如需要進(jìn)一步檢測Vero細(xì)胞毒素基因的存在,可通過接種Vero細(xì)胞或HeLa細(xì)胞,觀察細(xì)胞病變進(jìn)行判定;也可使用基因探針檢測或聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法進(jìn)行志賀毒素基因(stx1、stx2)、eae、hly等基因的檢測。

  • 2. 定量檢驗
  • 平板計數(shù)法:適用于該菌含量較高的食品。選取適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液,每個稀釋度接種2個無菌平皿,每皿1mL。同時取1mL稀釋液加入無菌平皿做空白對照。將冷至45℃±0.5℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)傾注于每個平皿中,待瓊脂凝固后,再加3mL~4mLVRBA-MUG覆蓋平板表層。凝固后翻轉(zhuǎn)平板,36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。選擇菌落數(shù)在10CFU~100CFU之間的平板,暗室中360nm~366nm波長紫外燈照射下,計數(shù)平板上發(fā)淺藍(lán)色熒光的菌落。

  • MPN計數(shù)法:適用于該菌含量較低(<100CFU/g)且雜菌含量較高的食品。按一定比例稀釋樣品,接種至多管發(fā)酵管中,根據(jù)陽性管數(shù)查MPN表,報告每克(或每毫升)樣品中大腸埃希氏菌O157:H7/NM的Zui可能數(shù)(MPN)。

  • 三、結(jié)果報告

    綜合生化和血清學(xué)試驗結(jié)果,報告25g(或25mL)樣品中檢出或未檢出大腸埃希氏菌O157:H7或大腸埃希氏菌O157:NM。出具結(jié)果報告時,要寫明檢出的O157菌的具體血清型是H7或NM。


    關(guān)鍵詞

    第三方檢測機(jī)構(gòu) , 標(biāo)準(zhǔn)檢測 , 國標(biāo)檢測 , 檢測 , 檢測中心

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