將人的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）或外周血淋巴細(xì)胞注射入免疫缺陷小鼠體內(nèi)來(lái)重建人的免疫系統(tǒng)，是腫瘤免疫研究及藥物開(kāi)發(fā)中常用的動(dòng)物模型構(gòu)建方法，其標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)涉及多個(gè)方面，以下從模型構(gòu)建、檢測(cè)指標(biāo)、檢測(cè)方法、結(jié)果評(píng)價(jià)四個(gè)方面進(jìn)行詳細(xì)介紹：

模型構(gòu)建

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇：通常選用重度免疫缺陷小鼠，如NOG、NSG、B-NDG等，這些小鼠體內(nèi)缺乏T、B、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞，為外源人免疫細(xì)胞的植入和存活提供了條件。

細(xì)胞來(lái)源與處理：

PBMC來(lái)源：可從健康人外周血中分離獲得，也可從外科手術(shù)切除的免疫組織中分離。

細(xì)胞處理：通過(guò)密度梯度離心法（如ue法）分離出PBMC，調(diào)整細(xì)胞濃度至適宜范圍（如2?5×107個(gè)/ml），用于后續(xù)注射。

注射方式與劑量：

注射方式：通常采用尾靜脈注射或腹腔注射。

注射劑量：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和小鼠體重確定，一般注射2?5×106個(gè)PBMC/只小鼠。

模型構(gòu)建時(shí)間：注射PBMC后，Zui快一周即可檢測(cè)到人CD3+T細(xì)胞；大約2周左右，免疫細(xì)胞會(huì)快速重建；大約4周左右，小鼠外周血中可檢測(cè)到約50%的人CD45+細(xì)胞，其中約90%為CD3+T細(xì)胞，CD4+:CD8+ T細(xì)胞比率約為1:1。

檢測(cè)指標(biāo)

免疫細(xì)胞重建情況：

人CD45+細(xì)胞比例：反映人免疫細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的重建程度。

T細(xì)胞亞群比例：包括CD3+、CD4+、CD8+ T細(xì)胞比例，評(píng)估T細(xì)胞免疫功能的重建情況。

其他免疫細(xì)胞比例：如B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等，評(píng)估免疫系統(tǒng)的全面重建情況。

移植物抗宿主?。℅vHD）發(fā)生情況：

臨床表現(xiàn)：觀察小鼠體重變化、活動(dòng)狀態(tài)、毛發(fā)狀況、皮膚病變等。

病理檢查：對(duì)小鼠主要臟器進(jìn)行病理檢查，評(píng)估GvHD的嚴(yán)重程度。

免疫功能檢測(cè)：

淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)：評(píng)估T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖能力。

細(xì)胞毒試驗(yàn)：評(píng)估NK細(xì)胞、CTL細(xì)胞等細(xì)胞毒效應(yīng)細(xì)胞的殺傷活性。

抗體生成檢測(cè)：檢測(cè)小鼠血清中人IgG、IgM等抗體的含量，評(píng)估體液免疫功能的重建情況。

檢測(cè)方法

流式細(xì)胞術(shù)：用于檢測(cè)小鼠外周血、脾臟等組織中人免疫細(xì)胞的比例和亞群分布。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：用于檢測(cè)小鼠血清中人IgG、IgM等抗體的含量。

淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)：采用MTT比色法或H-TdR摻入法檢測(cè)T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖能力。

細(xì)胞毒試驗(yàn)：采用Cr釋放法檢測(cè)NK細(xì)胞、CTL細(xì)胞等細(xì)胞毒效應(yīng)細(xì)胞的殺傷活性。

病理檢查：對(duì)小鼠主要臟器進(jìn)行HE染色等病理檢查，評(píng)估GvHD的嚴(yán)重程度。

結(jié)果評(píng)價(jià)

免疫細(xì)胞重建評(píng)價(jià)：根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果，評(píng)估人免疫細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的重建程度。一般來(lái)說(shuō)，小鼠外周血中人CD45+細(xì)胞比例超過(guò)25%可認(rèn)為免疫構(gòu)建成功。

GvHD評(píng)價(jià)：根據(jù)小鼠臨床表現(xiàn)和病理檢查結(jié)果，評(píng)估GvHD的發(fā)生情況和嚴(yán)重程度。GvHD的發(fā)生會(huì)縮短實(shí)驗(yàn)觀察窗，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

免疫功能評(píng)價(jià)：根據(jù)淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒試驗(yàn)和抗體生成檢測(cè)結(jié)果，評(píng)估小鼠免疫功能的重建情況。免疫功能重建良好的小鼠模型更適用于腫瘤免疫研究及藥物開(kāi)發(fā)。