《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002 年版）2.3.8.5哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗國標(biāo)檢測是用于檢測消毒產(chǎn)品遺傳毒性的重要試驗，以下是對該試驗的詳細(xì)介紹：

一、試驗?zāi)康?/h3>

利用細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢測實驗動物骨髓細(xì)胞染色體畸變率，以評價消毒劑的致突變性。

二、試劑準(zhǔn)備

1. 陽性對照物：常用環(huán)磷酰胺、絲裂霉素 C 等。

2. 秋水仙素：取 40mg 秋水仙素溶解于 100ml 無菌的 0.85% 氯化鈉溶液中，過濾除菌，配制成 0.04%的秋水仙素溶液。

3. 氯化鉀溶液：0.075mol/L。

4. 固定液：甲醇/冰醋酸（3:1，V/V），臨用現(xiàn)配。

5. 姬姆薩染液：按特定方法配制，用于染色體的染色。

6. 磷酸鹽緩沖液：1/15mol/L，pH7.4。

三、實驗動物與分組

1. 實驗動物：選用健康成年大鼠或小鼠，體重 25g~30g（大鼠）或 180g~220g（若選用大鼠）。

2. 試驗分組：隨機分為 5 組，至少 3 個受試物劑量組（如1/2LD50、1/5LD50、1/20LD50），另設(shè)陽性對照組和陰性（溶劑）對照組，每組 6只動物，雌雄各半。若采用一次Zui大限度試驗，測得 LD50 大于 5000mg/kg 體重，即以 5000mg/kg體重為高劑量。

四、操作程序

1. 染毒方式：采用經(jīng)口灌胃方式，共染毒兩次，間隔 24h。于第二次染毒后 6h 處死動物。處死動物前 2h~4h 腹腔注射0.04%秋水仙素溶液，劑量為 4mg/kg 體重。

2. 樣本采集與處理：

3. 用頸椎脫臼法處死動物，取出股骨，剔除肌肉等組織。

4. 剪去股骨兩端，用注射器吸取 5ml 生理鹽水，從股骨一端注入，用 10ml 離心管從股骨另一端接取流出的骨髓細(xì)胞懸液。

5. 將骨髓細(xì)胞懸液離心（1000r/min，5min~7min），除上清液。加 0.075mol/L 氯化鉀溶液7ml，用滴管將細(xì)胞輕輕混勻，置 37℃水浴中低滲處理 7min。

6. 加入 2ml 甲醇/冰醋酸固定液，混勻。離心（1000r/min，5min~7min），棄上清液。再加入 7ml固定液，混勻，固定 7min。離心（1000r/min，7min），棄去上清液。

7. 用同法再固定 1 次~2 次，棄上清液，加入數(shù)滴新鮮固定液，混勻。

8. 染色體標(biāo)本制備與觀察：

9. 用混懸液滴片，自然干燥。

10. 用姬姆薩染液染色，觀察和記錄染色體結(jié)構(gòu)的異常和數(shù)量的異常。

五、觀察指標(biāo)與結(jié)果分析

1. 觀察指標(biāo)：每組各選 100個染色體分散良好的中期分裂相細(xì)胞，進行染色體畸變分析。染色體結(jié)構(gòu)異?？捎袛嗔选⑽⑿◇w、有著絲點環(huán)、單體互換、雙微小體、裂隙、粉碎化等。

2. 結(jié)果分析：

3. 計算畸變細(xì)胞率：畸變細(xì)胞率為 100個中期分裂相細(xì)胞中有染色體畸變的細(xì)胞數(shù)。一個中期分裂相細(xì)胞出現(xiàn)兩種或多種畸變，仍按一個有染色體畸變細(xì)胞計。

4. 陽性與陰性（溶液）對照組的操作程序同試驗組。只是陽性組選用環(huán)磷酰胺（40mg/kg體重）或絲裂霉素（1.5mg/kg~2.0mg/kg 體重）作為受試物的替代物。

六、評價規(guī)定

用 χ2檢驗或其他適當(dāng)?shù)娘@著性檢驗方法對所得試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。當(dāng)各劑量組與陰性（溶劑）對照組相比，畸變細(xì)胞率的增加有顯著性意義，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系時；或僅一個劑量組畸變細(xì)胞率增加有顯著性意義，并經(jīng)重復(fù)試驗證實時，可判為該受試物在本試驗中具有致突變性。