《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002 年版）2.3.8.8 睪丸生殖細胞染色體畸變試驗國標檢測內(nèi)容如下：

一、試驗?zāi)康?/h3>

利用細胞遺傳學(xué)方法，以哺乳動物體內(nèi)試驗檢測受試物引起的生殖細胞染色體損傷。試驗有小鼠精原細胞染色體畸變試驗和小鼠精母細胞染色體畸變試驗，可根據(jù)情況選做其一，或兩者均做。

二、試劑準備

1. 受試物：用水、植物油配成溶液，或用 0.5% 羧甲基纖維素鈉制成混懸液。

2. 陽性對照物：常用環(huán)磷酰胺，或絲裂霉素。

3. 秋水仙素（0.04%）：取 40mg 秋水仙素，溶于 100ml 0.85% 氯化鈉溶液中，過濾除菌。

4. 甲醇/冰醋酸（3:1，V/V）固定液：臨用現(xiàn)配。

5. 枸櫞酸三鈉。

6. 姬姆薩染液。

三、實驗動物與分組

1. 實驗動物：選用 3 月~4 月齡，體重 25g~30g 的雄性小鼠。動物總數(shù)不少于 25 只。

2. 試驗分組：受試物至少設(shè) 3 個試驗劑量組，每個劑量組 5只動物。另設(shè)陽性對照組和陰性（溶劑）對照組。陽性對照組用環(huán)磷酰胺（40mg/kg 體重）或絲裂霉素 C（1.5mg/kg~2mg/kg體重），腹腔注射。

四、操作程序

1. 小鼠精原細胞染色體畸變試驗：

2. 用經(jīng)口灌胃方式，共染毒兩次，間隔 24h。

3. 于第二次染毒后 6h 處死動物。處死動物前 3.5h~5.0h 腹腔注射 0.04% 秋水仙素溶液，劑量為 4mg/kg體重。

4. 小鼠精母細胞染色體畸變試驗：

5. 灌胃染毒，每天 1 次，連續(xù) 5d。

6. 于第 1 次染毒后的第 12d~14d 將受試動物處死。處死動物前 3.5h~5.0h，腹腔注射 0.04%秋水仙素溶液（4mg/kg 體重）。

7. 樣本處理：

8. 用頸椎脫臼法處死小鼠，取睪丸，去除脂肪。置含 2.2% 枸櫞酸三鈉溶液平皿中去除睪丸被膜，用針頭使曲精小管松散。

9. 用吸管盡可能去除 2.2% 枸櫞酸三鈉溶液，將曲精小管置于含 3ml~4ml 低滲液（1% 枸櫞酸三鈉）的試管中。10min后更換低滲液，以去除碎片和精子。在室溫下，低滲時間總計不超過 25min。低滲結(jié)束后去除低滲液。加入預(yù)冷的固定液（甲醇/冰醋酸），固定10min 后，更換固定液，再固定 10min。第 3 次固定至少 30min，也可在冰箱中過夜。

10. 用鑷子將已固定的曲精小管移到含 50% 醋酸 5ml的離心管中，吸管吹打至不透光，離心（1000r/min，5min）。

11. 將固定液 1.0ml~1.5ml 加至離心所得細胞沉淀物中。滴管吹打后，滴 2 滴至用 70%乙醇浸濕的玻片，分散后，熱風(fēng)干燥。

12. 用姬姆薩應(yīng)用液在室溫染色 10min，自來水淋洗兩次。

13. 顯微鏡檢查：

14. 以油鏡檢查染色體結(jié)構(gòu)的異常情況。每只動物做兩個睪丸，每個睪丸分析 50 個中期分裂相精原細胞（或精母細胞）。

15. 記錄觀察染色體型和染色單體型染色體的結(jié)構(gòu)異常。對精母細胞染色體還觀察相互易位、X-Y和常染色體的單價體。檢查染色體數(shù)目異常時，記錄非整倍體和多倍體。在小鼠精母細胞染色體畸變試驗時，只有當(dāng)?shù)谝淮螠p數(shù)分裂中，四倍體生殖細胞有一個被確認為四價體時才有意義。

五、評價規(guī)定

用 χ2檢驗，或其他適當(dāng)?shù)娘@著性檢驗方法對所得試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。當(dāng)各劑量組與陰性（溶劑）對照組相比，畸變細胞率有顯著性意義的增加，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系時；或僅一個劑量組有顯著性意義的增加，經(jīng)重復(fù)試驗證實后，可判為該受試物對哺乳動物睪丸細胞具有致突變性。