DPPH自由基清除原理的機(jī)制主要是通過DPPH分子與自由基發(fā)生反應(yīng)，將自由基轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的分子，從而達(dá)到清除自由基的目的。DPPH分子是一種紫色的有機(jī)自由基，其分子結(jié)構(gòu)中含有一個未成對的氮原子，使其呈現(xiàn)出明顯的紫色。當(dāng)DPPH分子遇到自由基時，自由基會與DPPH分子發(fā)生反應(yīng)，將DPPH分子的未成對電子與自由基中的未成對電子結(jié)合，使DPPH分子從紫色變?yōu)闊o色，同時將自由基轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的分子。這個過程是一個氧化還原反應(yīng)，也是DPPH自由基清除原理的基本機(jī)制。

檢測方法

1.分光光度法

分光光度法是一種常用的檢測方法，基本原理是通過測量化合物與DPPH反應(yīng)后的溶液吸光度的變化來評估清除DPPH自由基能力。實驗過程如下：

1）準(zhǔn)備1mM的DPPH乙醇溶液。

2）將待測化合物按一定濃度體系添加到相應(yīng)的試管中。

3）將相同體積的DPPH溶液加入到每個試管中，混勻。

4）放置在室溫下，靜置反應(yīng)30分鐘。

5）使用紫外可見分光光度計測量反應(yīng)體系的吸光度，計算清除率。

2.電子順磁共振法（EPR）

電子順磁共振法是另一種常用的方法，通過測量化合物對DPPH自由基的清除能力，進(jìn)而評估其抗氧化活性。實驗過程如下：

1）準(zhǔn)備含有DPPH和待測化合物的溶液。

2）使用電子順磁共振儀測量樣品的EPR信號，同時測量含有DPPH和不含DPPH的樣品作為參比。

3）通過比較樣品與參比的EPR信號來計算清除率。

3.原子力顯微鏡方法（AFM）

原子力顯微鏡方法是一種非常靈敏的方法，可以用于直接觀察化合物對DPPH自由基的清除作用。實驗過程如下：

1）制備DPPH自由基薄膜。

2）將待測化合物沉積到DPPH自由基薄膜上。

3）使用原子力顯微鏡觀察樣品的表面形態(tài)變化。

4）通過觀察DPPH顏色的變化和表面形態(tài)的變化來評估清除率。

4.熒光法

熒光法是一種快速、靈敏且簡便的檢測方法，利用化合物與DPPH反應(yīng)后熒光上轉(zhuǎn)換的變化來評估清除DPPH自由基能力。實驗過程如下：

1）制備DPPH乙醇溶液。

2）將待測化合物與DPPH溶液混合。

3）使用熒光光譜儀測量樣品的熒光強(qiáng)度的變化。

4）通過熒光強(qiáng)度的變化來計算清除率。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

1、T/AHFIA 069-2022 白酒DPPH自由基清除率的測定酶標(biāo)儀法

2、T/SHRH 006-2018化妝品-自由基（DPPH）清除實驗方法