而是對完整的斑馬魚胚胎進(jìn)行探針雜交及檢測，從整體上把握探針的結(jié)合部位，然后對胚胎進(jìn)行切片，以確定探針結(jié)合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學(xué)研究中是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法，原位雜交的探針可以是同位素的探針，用自顯影來檢測；也可以是非同位素的探針，通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者，以標(biāo)記探針，然后用酶聯(lián)的方法進(jìn)行檢測。

在ISHH，整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期是比較長的，實(shí)驗(yàn)程序也比較繁雜，而雜交在ISHH整個(gè)實(shí)驗(yàn)中可被認(rèn)為是“短兵相接”的一步。雜交前的一切準(zhǔn)備工作如增加組織通透性都是為了在雜交這一步驟中核酸探針能進(jìn)入細(xì)胞或組織與其內(nèi)的靶核苷酸相結(jié)合。因此，雜交是ISHH中關(guān)鍵的而且是重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。雜交是將雜交液滴于切片組織上，GISH，加蓋硅化的蓋玻片，防止孵育過程中的高溫（50℃左右）導(dǎo)致雜交液的蒸發(fā)。為保證雜交所需的濕潤環(huán)境，可將其放在盛有少量5×SSC或2×SSC（standardsaline citrate，SSC）溶液的硬塑料盒中進(jìn)行孵育。雜交液的成分和預(yù)雜交液基本相同，所不同的是加入了標(biāo)記的核酸探針和硫酸葡聚糖。

核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交；根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA，RNA-DNA，RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細(xì)胞的固定，預(yù)雜交，雜交，沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。

我們在這兒介紹的是整胚原位雜交，不同于一般的在載片上對細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測的原位雜交，

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