免疫組織化學是一項在醫(yī)學基礎與臨床科研中被廣泛應用的一項技術，免疫組化染色服務也是生物公司的一項常規(guī)服務之一。該技術融合了抗原和抗體特異性結合的免疫學技術與組織學技術，通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色，來對組織或細胞內(nèi)抗原進行定位和定量研究。肽類、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、細胞因子、受體、表面抗原等，它們的組織細胞內(nèi)具有抗原性的物質(zhì)，所以均可以用免疫組織化學方法顯示。免疫組化常用的顯色劑包括熒光素、酶、生物素和鐵蛋白等。

免疫組化染色和Western印跡分析、ELISA技術是免疫學研究的3大工具，分別用于定位、定性和定量研究。免疫組織化學把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質(zhì)，并可在原位顯示相應的基因和基因表達產(chǎn)物。收集整理網(wǎng)絡上的資料，歸納一下免疫組化染色常用于的標記物。

1、異硫氰酸熒光素（FITC）

FITC性質(zhì)穩(wěn)定，易溶于水和乙醇，能與蛋白質(zhì)結合，是檢測組織細胞內(nèi)蛋白質(zhì)較為常用的熒光探針。它還能標記抗體，可用于免疫組織化學單染或多重染色，其缺點是在光照下容易淬滅，易受自發(fā)熒光影響。Zui大激發(fā)光波長為490nm；Zui大發(fā)射光波長為525nm，呈現(xiàn)黃綠色熒光。免疫組化染色是醫(yī)學和生命科學研究中經(jīng)常要使用的研究方法。美迪西提供免疫組化染色服務，其生物部在體外生物學領域有豐富廣泛的經(jīng)驗，通過酶水平測定、細胞水平測定、細胞生物學、生物化學、體外同位素測定、穩(wěn)定細胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術等，提供一套完整的生物學服務。

2、四乙基羅丹明（RB200）

RB200能與細胞內(nèi)蛋白質(zhì)結合，不溶于水，易溶于乙醇和丙酮，性質(zhì)穩(wěn)定，可長期保存，廣泛應用于雙標記示蹤染色。Zui大激發(fā)光波長為570nm，Zui大發(fā)射光波長為595-600nm，熒光顯微鏡下發(fā)橙紅色熒光。

3、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)：

該熒光素能與細胞內(nèi)蛋白質(zhì)結合，比FITC穩(wěn)定性好，在生理條件下對pH值變化不敏感，熒光強度受自發(fā)熒光干擾小。Zui大激發(fā)光波長為550nm；Zui大發(fā)射光波長為620nm，呈橙紅色熒光，與FITC發(fā)出的黃綠色熒光對比鮮明，常用于免疫熒光組織化學雙重染色。

4、花青類染料

常用的有Cy3、Cy5等，能與細胞內(nèi)蛋白質(zhì)結合。這類染料的熒光特性與傳統(tǒng)熒光素類似，但水溶性和對光穩(wěn)定性較強，熒光量子產(chǎn)率較高，對pH等環(huán)境不敏感。常用于多重染色。

5、乙酸甲酯

其本身不發(fā)熒光，但透膜進入細胞質(zhì)后，在酯酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂袩晒馓匦缘囊宜峒柞?。其激發(fā)光譜有pH依賴性，是使用Zui多的細胞內(nèi)pH熒光指示劑。Zui大激發(fā)光波長為505nm，Zui大發(fā)射光波長為530nm，呈綠色熒光。

6、Indo-1

Indo-1是典型的雙發(fā)射熒光探針，無鈣時在485nm左右有發(fā)射峰，結合鈣后，則在405nm處有發(fā)射峰，兩者的比值與細胞內(nèi)游離鈣離子濃度成線性關系，將此比值與標準曲線相比即可得出細胞內(nèi)游離鈣濃度，因此，可利用此探針定量檢測細胞內(nèi)游離鈣離子濃度。

7、量子點( dot)

量子點是近年來研制的一種新型熒光染料，又稱半導體納米晶體，是由幾百或幾千個納米級顆粒構成的半導體材料，性質(zhì)穩(wěn)定，溶于水，細胞本身不能合成和組裝。量子點具有熒光時間長、產(chǎn)生多種顏色、檢測方便和應用范圍廣等優(yōu)點。

8、辣根過氧化物酶

辣根過氧化物酶是一種糖蛋白，由于在辣根中該酶的含量很高，故得名。它以鐵卟啉為輔基，在過氧化氫存在時能催化苯酚、苯胺及其取代物聚合。通常用做光學和電子顯微鏡的組織化學示蹤物。該酶比活性高，穩(wěn)定，分子量小，純酶容易制備，所以較為常用，不但可以用于免疫組化染色，也廣泛運用于免疫類（ELISA）試劑盒。過氧化物酶作為多個試劑盒顯色體系的關鍵成分，對試劑盒的質(zhì)量有重要影響。

9、堿性磷酸酶

堿性磷酸酶（AKP），又稱堿性磷酸單酯酶，是酶組織化學中Zui常用的酶之一。分布廣泛，常見于活躍運輸?shù)哪ど稀Ｔ撁冈趬A性環(huán)境下能催化各種醇和酚的磷酸酯水解，Zui適pH為9.2-9.4，可被Mg2+、Mn2+和某些氨基酸所激活；氰化物、碘液、砷酸鹽等可抑制其活性。顯示AKP的方法很多，主要有鈣鈷法和同時偶聯(lián)法。前者所需試劑便宜，容易購買，操作簡單，但會出現(xiàn)假陽性。后者方法較靈敏，而且在正常組織內(nèi)不存在萘酚，因此不會出現(xiàn)假陽性，但所需試劑較難購買。

10、生物素（biotin）

生物素是B族維生素之一。生物素在羧化、脫羧和轉(zhuǎn)羧化反應中起輔酶作用。生物素是含硫水溶性維生素。廣布于動物及植物組織，已從肝提取物和蛋黃中分離，是多種羧化酶輔基的成分。生物素標記反應簡單、溫和且很少抑制抗體活性，生物素標記的抗體可存放多年而不失活。能與生物素結合的二級試劑素，所需的各種標記物均可購置。此外，親和素和鏈霉親和素的結合背景水平非常低，結合緊密且快速，抗體很容易與經(jīng)過化學修飾的活化生物素結合。生物素又可以與結合有酶、熒光染料的親和素或鏈霉親和素連接，后者已有商品試劑供應。這樣只需將純化抗體與生物素結合，就可用各種不同的標記物來檢測。

11、金屬離子和金屬蛋白復合物

金屬離子和金屬蛋白復合物如鐵蛋白、金和汞可以作為免疫組化反應中的標記物。如鐵蛋白等，主要應用于免疫電鏡。免疫金銀法的基本原理是用特異性抗體與抗原反應，隨后用金標記的間接抗體或SPA蛋白，再與特異性抗體結合，用乳酸銀處理，使銀顆粒沉積在金顆粒上，還原銀反應而顯示出黑褐色。適用于石蠟切片、冰凍切片，培養(yǎng)細胞，細胞涂片和樹脂包埋的電鏡切片。這種方法敏感性高，可檢測組織中微量抗原，定位準確、無擴散現(xiàn)象且背景清洗，對比度好、方法簡便。

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