殺菌試驗(yàn)

1 首先按產(chǎn)品說(shuō)明書要求配制消毒液。一律使用無(wú)菌硬水配制，配制的濃度為待測(cè)濃度的1.25倍，置20℃±1℃水浴備用。取已配制濃度為1×108cfu/ml～5×108cfu/ml,(實(shí)際作用時(shí)菌濃度為107cfu/ml）。在無(wú)菌大試管，先加入0.5ml有機(jī)干擾物質(zhì)，再加入0.5ml試驗(yàn)用菌懸液，混勻，置20℃±1℃ 水浴中5min后，用無(wú)菌吸管吸取上述濃度消毒液 4.0 ml 注入其中，迅速混勻并立即記時(shí)。

2 待菌藥相互作用至各預(yù)定時(shí)間，分別吸取 0.5ml 菌藥混合液加于 4.5ml 經(jīng)滅菌的中和劑中，混勻。

3 各管菌藥混合液經(jīng)加中和劑作用 10min 后，分別吸取 1.0ml樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種 2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可進(jìn)行系列10倍稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

4 同時(shí)用稀釋液代替消毒液，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。

5 所有試驗(yàn)樣本均在 37℃ 溫箱中培養(yǎng)，對(duì)細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h 觀察終結(jié)果；對(duì)細(xì)菌芽孢需培養(yǎng) 72h 觀察終結(jié)果。

6 試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算各組的活菌濃度 （cfu/ml），并換算為對(duì)數(shù)值（N），并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值：

殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)＝對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（No）-試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值（Nx）

1)在懸液定量殺滅試驗(yàn)中,各次試驗(yàn)陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù)在1×107cfu/ml～5×107cfu/ml范圍內(nèi)，各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均≥5，為消毒合格。

2) 在載體定量殺滅試驗(yàn)中，各次試驗(yàn)陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù)在5×105cfu/片～5×106cfu/片范圍內(nèi)，各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均≥3，為消毒合格。

3) 空氣消毒實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)和模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，各次試驗(yàn)陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照菌數(shù)均在5×104cfu/m3～5×105cfu/m3范圍內(nèi)，各次試驗(yàn)的殺滅率≥99.90%，現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)各次自然菌消亡率≥90.00%,為消毒合格。

針對(duì)處方工藝開(kāi)發(fā)階段，按照你這樣的研究思路是可以初步確定處方中抑菌劑的用量了，但是不同的抑菌劑的抑菌譜是有差異的，不可以因?yàn)檩o料資質(zhì)問(wèn)題輕易選其他抑菌劑替代，比如你所說(shuō)的尼泊金酯類的，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的抑菌活性弱，兩者聯(lián)合使用后抑菌譜較尼泊金乙酯寬，所以國(guó)外選擇兩者合用。