你是否有過如下經(jīng)歷過：

? 內(nèi)參好好的，目的條帶卻“人間蒸發(fā)”？

? 背景黑得像夜空，完全認(rèn)不出哪條是目的蛋白？

? 白圈像甜甜圈，雜帶多到鋪滿屏，讓人看了直接沉默？

別慌——?很多新手都踩過這些坑?，不是你技術(shù)差，是需要“正確姿勢(shì)”

上海貝絲檢測外泌體WB條帶圖

正常WB條帶標(biāo)準(zhǔn)：

條帶大小正確、邊緣清晰銳利、背景干凈無雜斑、內(nèi)參條帶（β-actin等）均勻正常，配合預(yù)染Marker精準(zhǔn)定位，才是符合要求！

上海貝絲檢測外泌體WB條帶圖

13種常見翻車問題+原因分析

1.全膜無信號(hào)，一片空白

一抗加錯(cuò)/失效｜二抗種屬不匹配（兔一抗不能配鼠二抗）｜轉(zhuǎn)膜完全失敗

2.背景過臟，黑乎乎一片

洗膜不到位（TBST搖床洗3次，每次10分鐘）｜封閉不充分（5%牛奶/BSA多封閉1h）｜抗體濃度過高

3.條帶拖尾，呈彗星狀

蛋白上樣量過大（控制在50μg以內(nèi)）｜一抗孵育時(shí)間過長（4℃過夜改室溫2h）

4.雜帶繁多，看不清目的條帶

一抗特異性差，及時(shí)換驗(yàn)證過的抗體｜抗體濃度偏高，做梯度稀釋調(diào)試

5.黑點(diǎn)黑斑，密密麻麻

操作沒戴手套，膜沾指紋灰塵｜封閉牛奶結(jié)塊，更換進(jìn)口牛奶或改用BSA

6.白圈似甜甜圈

轉(zhuǎn)膜時(shí)膠和膜之間留有氣泡，用玻璃棒滾壓徹底除泡

7.條帶中間反白

HRP底物消耗過快，更換ECL Plus底物，縮短曝光時(shí)間

8.條帶重影

信號(hào)強(qiáng)度過高，調(diào)低抗體濃度｜壓片時(shí)晃動(dòng)移位，放穩(wěn)后不要觸碰

9.條帶彎曲成月牙狀

電泳電流不均，避開電泳槽兩側(cè)的上樣孔

10.條帶殘缺，缺角少塊

凝膠內(nèi)有氣泡雜質(zhì)｜灌膠后靜置消泡，樣品離心后再上樣

11.啞鈴型異常條帶

凝膠灌注不平整｜樣品雜質(zhì)過多，12000rpm離心10分鐘再上樣

12.條帶過淡，幾乎看不見

蛋白上樣量不足｜抗體效價(jià)低｜轉(zhuǎn)膜不合格，可用麗春紅染色檢查

13.微笑條帶/倒微笑條帶

U型微笑：電泳降溫不均，開啟冷水循環(huán)

∩型倒微笑：凝膠兩端未凝固，可37℃加速凝固

上海貝絲檢測外泌體WB條帶圖

?WB問題可參考的解決步驟：

對(duì)照組：陽性+陰性+空白對(duì)照，都要有。

分項(xiàng)排查：無信號(hào)先查轉(zhuǎn)膜和抗體，背景臟就加強(qiáng)洗膜和封閉。

詳細(xì)記錄：細(xì)化實(shí)驗(yàn)記錄，抗體批次、曝光時(shí)間、孵育時(shí)長全記清。

貝絲檢測提供專業(yè)WB實(shí)驗(yàn)服務(wù)，全程標(biāo)準(zhǔn)化操作，細(xì)節(jié)嚴(yán)控，輕松跑出清晰干凈的合格條帶。