血清血液豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)方法GB/T34729-2017第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)-小妖精我要你真緊好爽視頻6101k免費(fèi)觀看_國(guó)產(chǎn)精品無(wú)碼AV在線觀小說(shuō)
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GB/T 34729-2017《豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)方法》標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的核心要點(diǎn)如下：
標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：GB/T 34729-2017
發(fā)布日期：2017年11月1日
實(shí)施日期：2018年5月1日
主管部門(mén)：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部
歸口單位：全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)
適用范圍：適用于豬血清或血漿樣本中豬瘟病毒（CSFV）抗體的定性分析，但無(wú)法區(qū)分疫苗免疫抗體和野毒感染抗體。
技術(shù)基礎(chǔ)：基于抗原抗體特異性結(jié)合原理，采用阻斷ELISA技術(shù)。
反應(yīng)過(guò)程：將豬瘟病毒抗原包被在酶標(biāo)板上，加入待檢血清后，若血清中含有豬瘟病毒抗體，則抗體與包被抗原結(jié)合，阻斷后續(xù)酶標(biāo)單克隆抗體與抗原的結(jié)合。通過(guò)檢測(cè)酶標(biāo)單克隆抗體結(jié)合量，間接判斷血清中豬瘟病毒抗體的存在與否及含量。
豬瘟病毒E2蛋白：需純化處理，濃度一般為0.2μg/mL。
酶結(jié)合物：通常為HRP標(biāo)記的單克隆抗體，需商品化或自行制備，并嚴(yán)格控制標(biāo)記效率。
標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清：由豬瘟疫苗免疫仔豬制備，經(jīng)熒光抗體病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)為陽(yáng)性。
標(biāo)準(zhǔn)陰性血清：取自無(wú)母源抗體且未免疫豬瘟疫苗的仔豬，經(jīng)熒光抗體病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)為陰性。
其他試劑：包括包被液、磷酸鹽緩沖液、封閉液、濃縮洗液、稀釋液、底物液A、底物液B、終止液等。
酶標(biāo)儀：用于讀取吸光值，需具備450nm波長(zhǎng)檢測(cè)功能。
溫箱：用于樣本和試劑的溫育，需能控制溫度。
移液器：用于準(zhǔn)確量取各種試劑和樣本，需定期校準(zhǔn)。
其他設(shè)備：如生物安全柜、離心機(jī)、微量振蕩器等。
樣本采集與處理：
采集豬靜脈血，室溫靜置后離心分離血清。
血清樣本應(yīng)清亮、無(wú)溶血，若需長(zhǎng)期保存應(yīng)置于-20℃以下冷凍條件。
抗原包被：
用包被液將豬瘟病毒E2蛋白稀釋至規(guī)定濃度，包被酶標(biāo)板。
包被后的酶標(biāo)板需置于2℃~8℃條件下過(guò)夜或按規(guī)定時(shí)間包被。
封閉處理：
包被結(jié)束后，棄去孔中液體，用封閉液封閉未結(jié)合的抗原位點(diǎn)。
樣本檢測(cè)：
在抗原包被板中加入稀釋液和待檢血清，同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。
溫育一定時(shí)間后，棄去反應(yīng)液，用洗滌液洗滌板孔。
加入酶結(jié)合物，溫育后再次洗滌。
加入底物液顯色，避光反應(yīng)一定時(shí)間后加入終止液終止反應(yīng)。
結(jié)果讀取與判定：
在酶標(biāo)儀上讀取各孔的吸光值。
計(jì)算陰性對(duì)照孔和陽(yáng)性對(duì)照孔的平均值，以及樣本的阻斷率。
根據(jù)阻斷率判定樣本是否為陽(yáng)性。
試驗(yàn)成立條件：標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照血清OD450nm值應(yīng)≥0.5，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率應(yīng)大于50%。
樣本判定：
阻斷率≤30%為樣品抗體陰性。
阻斷率在30%~40%之間為可疑。
阻斷率≥40%為樣品抗體陽(yáng)性。
試劑儲(chǔ)存與準(zhǔn)備：試劑應(yīng)按要求儲(chǔ)存，使用前需平衡至室溫。濃縮洗滌液使用前需按規(guī)定比例稀釋。
樣本處理：血清樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融，采集過(guò)程需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程。
儀器校準(zhǔn)與維護(hù)：酶標(biāo)儀等儀器需定期校準(zhǔn)和維護(hù)，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
生物安全：所有操作應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定，廢棄物處理需符合相關(guān)法律法規(guī)要求。
第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu) , 標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè) , 國(guó)標(biāo)檢測(cè) , 檢測(cè) , 檢測(cè)中心
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