在《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002版）中，大腸桿菌殺滅試驗(yàn)主要涉及生活飲用水消毒效果鑒定，通過實(shí)驗(yàn)室殺菌試驗(yàn)和天然水樣消毒試驗(yàn)兩個(gè)階段進(jìn)行檢測(cè)，以下是具體介紹：

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檢測(cè)生活飲用水消毒劑與消毒器械的殺菌效果，以驗(yàn)證其對(duì)生活飲用水消毒能否達(dá)到衛(wèi)生合格標(biāo)準(zhǔn)。

試驗(yàn)器材

1. 實(shí)驗(yàn)菌株：大腸桿菌（8099）懸液。取37℃培養(yǎng)18~24h的新鮮大腸桿菌斜面，用生理鹽水洗下菌苔，混勻后再用生理鹽水適當(dāng)稀釋，配制成試驗(yàn)用大腸桿菌懸液。

2. 微孔濾膜濾器和濾膜：濾膜孔徑為0.45μm~0.65μm，濾膜大小根據(jù)濾器型號(hào)確定，目前常用有直徑為35mm和47mm兩種。

3. 抽濾水泵或氣泵：用于抽濾。

4. 恒溫水浴箱：用于控制試驗(yàn)溫度。

5. 秒表：用于計(jì)時(shí)。

6. 三角燒瓶：用于配制和存放菌懸液等。

7. 廣口玻璃瓶（500ml）：用于存放水樣等。

8. 無齒鑷子：用于夾取濾膜等。

9. 品紅亞鈉培養(yǎng)基：用于大腸桿菌的培養(yǎng)和計(jì)數(shù)。

10. 中和劑：經(jīng)中和劑鑒定合格，用于消除試驗(yàn)微生物與消毒劑的混懸液中和微生物表面上殘留的消毒劑。

11. 細(xì)菌定量殺滅試驗(yàn)用其他器材：如移液器、試管等。

12. 天然水樣：由自然水體取樣，用于天然水樣消毒試驗(yàn)。

13. 模擬現(xiàn)場(chǎng)消毒裝置：用于模擬現(xiàn)場(chǎng)消毒條件。

14. 磁力攪拌器：用于使細(xì)菌在水中分布均勻。

試驗(yàn)階段

1. 實(shí)驗(yàn)室殺菌試驗(yàn)：以大腸桿菌為實(shí)驗(yàn)菌，用懸液定量殺菌試驗(yàn)法測(cè)出在試管中消毒所需的劑量。

2. 天然水樣消毒試驗(yàn)：由自然水體取樣，進(jìn)一步驗(yàn)證受試消毒劑或方法對(duì)成分較復(fù)雜的天然水的消毒效果。對(duì)用于較大水體（如人工游泳池水、高層建筑二次供水）消毒的設(shè)備和方法，必要時(shí)尚需進(jìn)行模擬現(xiàn)場(chǎng)或現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，以進(jìn)一步驗(yàn)證其消毒效果。

操作程序（以飲水消毒劑殺菌試驗(yàn)為例）

1. 實(shí)驗(yàn)分組：

2. 實(shí)驗(yàn)組：申請(qǐng)消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可證時(shí)，按使用說明書規(guī)定的Zui低劑量，設(shè)定1個(gè)濃度，3個(gè)作用時(shí)間（使用說明書規(guī)定的Zui低作用時(shí)間，規(guī)定Zui短作用時(shí)間的1.5倍和規(guī)定Zui短作用時(shí)間的一半），測(cè)定其對(duì)大腸桿菌的殺菌效果。進(jìn)行消毒產(chǎn)品監(jiān)督檢測(cè)時(shí)，按使用說明書規(guī)定的Zui低劑量，設(shè)定1個(gè)濃度，1個(gè)作用時(shí)間（使用說明書規(guī)定的Zui短作用時(shí)間），測(cè)定其對(duì)大腸桿菌的殺菌效果。

3. 陽性對(duì)照組：以未經(jīng)消毒的實(shí)驗(yàn)菌污染水樣進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

4. 陰性對(duì)照組：以試驗(yàn)所用同批次未經(jīng)使用的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)。

5. 操作程序：

6. 按要求配制實(shí)驗(yàn)菌污染水樣。

7. 將裝有實(shí)驗(yàn)菌污染水樣的三角燒瓶放入恒溫水浴箱（20℃±2℃）中，開動(dòng)磁力攪拌器，使細(xì)菌在水中分布均勻。先取2份實(shí)驗(yàn)菌污染水樣，進(jìn)行大腸桿菌活菌計(jì)數(shù)（陽性對(duì)照組）。

8. 待水樣的溫度恒定后加入消毒劑，迅速攪拌均勻。從開始加消毒劑起計(jì)時(shí)，按規(guī)定時(shí)間吸取水樣，注入裝有中和劑的無菌三角燒瓶中，以終止消毒作用。

9. 將中和后水樣，分別取一定量進(jìn)行大腸桿菌的活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

10. 將未接種大腸桿菌的試驗(yàn)用同批培養(yǎng)基平板置溫箱中培養(yǎng)（陰性對(duì)照組）。

11. 試驗(yàn)重復(fù)3次。

12. 評(píng)價(jià)規(guī)定：

13. 當(dāng)陽性對(duì)照組平均菌量在5×10?cfu/100ml~5×10?cfu/100ml，陰性對(duì)照組均無菌生長(zhǎng)時(shí)，在3次試驗(yàn)中均使大腸桿菌下降至0cfu/100ml的Zui低劑量，可判定為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)中飲水消毒Zui低有效劑量。

14. 若陽性對(duì)照和陰性對(duì)照未達(dá)上述要求，應(yīng)尋找原因，糾正后重做試驗(yàn)。