大豆異黃酮含量測定,GB/T 26625-2011檢測機(jī)構(gòu)-三上悠亞精品,演示一下白素貞
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GB/T 26625-2011《糧油檢驗(yàn) 大豆異黃酮含量測定高效液相色譜法》規(guī)定了采用高效液相色譜法（HPLC）測定大豆及其制品中主要異黃酮成分的方法，以下是對該標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)介紹：
該標(biāo)準(zhǔn)適用于大豆、豆奶粉、豆豉中大豆異黃酮含量的測定，測試方法的Zui低檢測限為2.5mg/kg。
試樣用甲醇-水溶液超聲波振蕩提取，提取液經(jīng)離心、濃縮、定容、過濾后，用高效液相色譜儀測定，外標(biāo)法定量。
試劑：除另有說明外，所用試劑均為分析純，水應(yīng)符合GB/T 6682中一級水的規(guī)定。包括乙腈（色譜純）、甲醇、乙酸等。
標(biāo)準(zhǔn)品：大豆甙（daidzin）、染料木甙（genistin）、大豆黃素（daidzein）、染料木素（genistein）、黃豆黃素（glycitin）、黃豆黃素甙元（glycitein），純度均不低于98%。
標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：
大豆異黃酮標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：分別準(zhǔn)確稱取適量的大豆甙、染料木甙等標(biāo)準(zhǔn)品，用60%甲醇配成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，-18℃避光保存，有效期6個(gè)月。
大豆異黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：分別移取上述各組分大豆異黃酮標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液0.5mL于同一10mL容量瓶中，用60%甲醇定容至刻度，配制成各組分濃度為50μg/mL的大豆異黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，0℃~4℃冷藏避光保存，有效期3個(gè)月。
大豆異黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取不同體積的大豆異黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液于10mL容量瓶中，用10%甲醇溶液配成各組分濃度0.25μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、1.50μg/mL、5.00μg/mL系列的大豆異黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，0℃~4℃冷藏避光保存，有效期一周。
其他材料：濾膜（0.45μm）。
高效液相色譜儀：配紫外檢測器。
分析天平：感量0.01mg、感量0.01g。
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。
超聲波清洗器：50W。
離心機(jī)：10000r/min。
粉碎機(jī)。
組織搗碎機(jī)。
濃縮瓶：250mL。
樣品篩：孔徑2.0mm。
大豆：取有代表性樣品約500g，用粉碎機(jī)粉碎使其全部通過孔徑2.0mm樣品篩，混勻，裝入潔凈容器作為試樣，密封備用。
豆豉：取有代表性樣品約500g，用組織搗碎機(jī)搗碎，混勻，裝入潔凈容器作為試樣，密封備用。
試樣保存：粉碎試樣于4℃以下保存。
提?。悍Q取5g（到0.01g）試樣于250mL具塞三角瓶中，加90mL90%甲醇溶液，置于超聲波清洗器中60℃提取30min，在離心機(jī)中10000r/min離心10min，上清液轉(zhuǎn)移至250mL濃縮瓶中，殘?jiān)偌尤?0mL90%甲醇溶液進(jìn)行提取，上清液也轉(zhuǎn)入250mL濃縮瓶，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器60℃濃縮至約40mL。濃縮液轉(zhuǎn)入50mL容量瓶，用10%甲醇溶液沖洗濃縮瓶并定容至刻度。取1mL提取液通過0.45μm濾膜，供高效液相色譜儀測定。
色譜參考條件：
色譜柱：RPC18柱（250mm×4.6mm，5μm）或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。
流動相：0.1%乙酸溶液和0.1%乙酸乙腈溶液，按表1的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫。
流速：1.0mL/min。
柱溫：40℃。
波長：260nm。
進(jìn)樣量：20μL。
測定：參考上述色譜條件調(diào)節(jié)高效液相色譜儀，使大豆異黃酮各組分的色譜峰完全分離。分別吸取適當(dāng)濃度的大豆異黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液進(jìn)行液相色譜測定，分別得到大豆異黃酮各組分的標(biāo)準(zhǔn)工作液峰面積和樣液大豆異黃酮各組分峰面積。如果樣液中大豆異黃酮某一組分峰面積與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中的該組分峰面積相差較大時(shí)，稀釋樣液或調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度后再行測定。
大豆異黃酮各組分含量按特定公式計(jì)算試樣中大豆異黃酮各組分含量（mg/kg）。
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第三方檢測技術(shù)服務(wù)，涂料檢測服務(wù)，環(huán)境生態(tài)監(jiān)測，計(jì)量檢測服務(wù)
一般項(xiàng)目：環(huán)境保護(hù)監(jiān)測；生態(tài)資源監(jiān)測；土地調(diào)查評估服務(wù)；工程和技術(shù)研究和試驗(yàn)發(fā)展；醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展；自然科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展；農(nóng)業(yè)科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展；終端計(jì)量設(shè)備銷售；計(jì)量技術(shù)服務(wù)；標(biāo)準(zhǔn)化服務(wù)；公路水運(yùn)工程試驗(yàn)檢測服務(wù)；進(jìn)出口商品檢驗(yàn)鑒定；環(huán)保咨詢服務(wù)；環(huán)境應(yīng)急治理服務(wù)（除許可業(yè)務(wù)外，可自主依法經(jīng)營法律法規(guī)非禁止或限制的項(xiàng)目）許可項(xiàng)目：檢驗(yàn)檢測服務(wù)；特種設(shè)備
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