流行病等細(xì)菌感染相關(guān)疾病是對公共衛(wèi)生的主要威脅，已成為全球的死亡原因之一。因此，迫切需要新的、高效的策略來對抗細(xì)菌感染，并有大量的努力致力于開發(fā)替代抗菌劑。抗菌劑的殺菌效果如何，需要通過一系列體外抗菌實驗來驗證。

作為第三方檢測中心，中科檢測機(jī)構(gòu)擁有CMA認(rèn)證檢測資質(zhì)，檢測設(shè)備齊全，數(shù)據(jù)科學(xué)可靠，可出具國家認(rèn)可的體外抗菌性能評價報告。

體外抗菌性能評價方法：孔徑抑菌法

孔徑抑菌法是一種簡單常用的體外抗菌測定方法。其原理是將待測物質(zhì)溶解于培養(yǎng)基中，然后在瓊脂平板上制作不同直徑的孔洞，將待測物質(zhì)溶液滴入孔洞中，觀察細(xì)菌在孔洞周圍的生長情況。如果待測物質(zhì)具有抑菌作用，則孔洞周圍會出現(xiàn)無菌區(qū)域。

操作步驟：

1.準(zhǔn)備瓊脂平板和待測物質(zhì)溶液。

2.在瓊脂平板上制作不同直徑的孔洞。

3.將待測物質(zhì)溶液滴入孔洞中。

4.培養(yǎng)—定時間后，觀察孔洞周圍的生長情況。

體外抗菌性能評價方法：Zui小抑菌濃度法

Zui小抑菌濃度法是一種定量評估待測物質(zhì)對細(xì)菌生長的抑制能力的方法。其原理是在一系列濃度梯度的待測物質(zhì)溶液中接種細(xì)菌，通過觀察Zui低有效濃度來評估其抗菌活性。

操作步驟：

1.準(zhǔn)備—系列待測物質(zhì)溶液，濃度遞增。

2.在試管中加入一定濃度的待測物質(zhì)溶液和細(xì)菌懸液。

3.培養(yǎng)—定時間后，觀察細(xì)菌生長情況。

4.根據(jù)Zui低有效濃度判斷待測物質(zhì)的抗菌活性。

體外抗菌性能評價方法：平板計數(shù)法

抗菌劑對細(xì)菌進(jìn)行殺菌處理以后，將細(xì)菌稀釋到合適的倍數(shù)進(jìn)行平板涂布并對長出的菌落進(jìn)行計數(shù)。通過計算細(xì)菌存活率或者致死率來表征抗菌劑抗菌效果。

體外抗菌性能評價方法：活死染色法

對細(xì)菌進(jìn)行活死染色也是一種常用的表征抗菌效果的方法?？咕鷦?xì)菌進(jìn)行處理后，再對細(xì)菌進(jìn)行活死染色。

目前有許多品牌的細(xì)菌活死染色試劑盒，以SYTO-9和PI為例，SYTO-9是一種能夠透過細(xì)胞膜的綠色熒光核酸染料，可用于活的和死的真核細(xì)胞的RNA和DNA染色，以及革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌。

PI是一種可對DNA染色的細(xì)胞核染色劑，在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。PI不能穿透完整細(xì)胞膜，但對凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透，并使細(xì)胞核紅染。

體外抗菌性能評價方法：清除生物膜法

近年來，隨著醫(yī)學(xué)界對某些環(huán)境中常見細(xì)菌所致的一些慢性和頑固性疾病的深入了解，發(fā)現(xiàn)生物膜（生物被膜）是導(dǎo)致這些細(xì)菌性疾病難以根治的主要原因。

以生物膜形式存在的細(xì)菌對抗生素等殺菌劑、惡劣環(huán)境及宿主免疫防御機(jī)制有很強(qiáng)的抗性，因此評價抗菌劑對生物膜的抑制效果也是評價抗菌劑殺菌效果的標(biāo)準(zhǔn)之一。

通過結(jié)晶紫染色觀察生物膜剩余面積或者測其OD值可以表征抗菌劑對生物膜的抑制效果。另外也可以用過熒光共聚焦成像來表征對生物膜的抑制效果。