DNATm值檢測(cè)，熔解溫度檢測(cè)，cma資質(zhì)-日日嚕嚕夜夜爽爽,精品精品國(guó)產(chǎn)歐美在線メイリン モデルコレクション メイ
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Tm值，即熔解溫度或解鏈溫度，是指DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)在熱變性過(guò)程中紫外吸收值達(dá)到Zui大值一半時(shí)的溫度。不同序列的DNA具有不同的Tm值，DNA中G-C堿基對(duì)的含量越高，Tm值也越高，二者之間呈正比例關(guān)系。在DNA變性（熔解）過(guò)程中，其紫外吸收（在260nm波長(zhǎng)處）值會(huì)隨著雙螺旋結(jié)構(gòu)的解開(kāi)而增加，直至完全解體。
在引物設(shè)計(jì)或其他與核酸相關(guān)的實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)確計(jì)算Tm值是非常重要的。對(duì)于長(zhǎng)度為25個(gè)核苷酸以下的引物，Tm值的計(jì)算公式為：Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)。對(duì)于更長(zhǎng)的寡聚核苷酸，Tm值的計(jì)算更為復(fù)雜，會(huì)考慮多種因素如堿基組成、引物長(zhǎng)度和使用的緩沖液離子強(qiáng)度等。
關(guān)于Tm值，北京清析技術(shù)研究院可提供Tm值測(cè)定等檢測(cè)項(xiàng)目。同時(shí)，北京清析技術(shù)研究院可對(duì)寡聚物，小鼠DNA，煙草花葉病毒，雞蛋蛋白，抗體，酶，大腸桿菌基因等進(jìn)行Tm值檢測(cè)。
檢測(cè)步驟
1 . 用循環(huán)恒溫裝置測(cè)Tm
按操作規(guī)程打開(kāi)紫外分光光度計(jì)預(yù)熱20 min。設(shè)定循環(huán)恒溫裝置于25 ℃ ,進(jìn)行光吸收的初步測(cè)定。若是自制DNA, 先于25 ℃測(cè)其A260 , 用標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉-檸檬酸溶液稀釋至A260 =0.4。并注意使其終體積適合于比色杯( 1 ml或3 ml)。
以標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉-檸檬酸溶液調(diào)整260 nm下光吸收零點(diǎn)。然后將裝有待測(cè)的稀釋DNA 溶液的比色杯置于分光光度計(jì)
的樣品室中, 平衡3 min 后測(cè)A260 。再將溫度升高到50 ℃ ,取出比色杯將其內(nèi)壁的氣泡趕出,測(cè)A260 。繼續(xù)升溫到80 ℃ , 平衡5 min 后測(cè)A260 。
按每次升高2 ℃ 的方式升溫, 然后平衡溫度( 5 min ) ,記錄A260 。按此方式一直進(jìn)行到A260 不再升高為止。
2 . 用恒溫水浴裝置測(cè)Tm
至少設(shè)定6個(gè)恒溫水浴裝置( 50 ℃、80 ℃、85 ℃、90 ℃、95 ℃、100 ℃) 。按操作規(guī)定預(yù)熱紫外分光光度計(jì)20 min。
DNA 溶液的濃度控制在A260 = 0.4。取試管(至少8 支) , 向其中各加入3 ml DNA 溶液, 蓋上帽子, 溫育15 min。其中一支試管放室溫,兩支試管放100 ℃ , 其余溫度水浴各一支, 溫育完后迅速冷卻試管, 室溫和100 ℃一支置于冰浴10 min , 而另一支100℃則緩慢冷卻到室溫。
測(cè)定各管DNA 溶液的A260 , 而緩慢冷卻的那支試管在室溫下至少放置1h 再測(cè)。
3 . 結(jié)果處理
計(jì)算各溫度下的A260 ( t)/ A260 ( 25 ℃ ) ,并以此比值對(duì)溫度作圖,連接各點(diǎn)成平滑曲線, 估計(jì)出光吸收增加的中點(diǎn), 此即Tm 。計(jì)算G-C%含量。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)
1、SN/T 2497.22-2010進(jìn)出口危險(xiǎn)化學(xué)品安全試驗(yàn)方法.第22部分:DNA的Tm值測(cè)定方法
DNATm值檢測(cè) , Tm值檢測(cè)機(jī)構(gòu) , 熔解溫度檢測(cè)
氣體檢測(cè),配方分析,失效分析,中藥成分檢測(cè),油墨成分分析
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