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德國拜發(fā)呋喃它酮aoz檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱： 德國拜發(fā)呋喃它酮aoz檢測試劑盒
產(chǎn)品類別： 化工 > 化學(xué)試劑
型    號(hào)： r3799
規(guī)    格： 96孔
品    牌： 德國拜發(fā)

nitrofuran（amoz）

酶標(biāo)免疫分析定量檢測呋喃它酮?dú)埩粼噭┖小５聡鴕-biopharm公司制造（中文翻譯件僅供參考，以試劑盒內(nèi)附的英文原件為準(zhǔn)。）

ridascreen? 呋喃它酮檢測試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)r3711）

簡介

競爭酶標(biāo)免疫法定量測定肉類（雞、豬、牛）、蜂蜜和魚蝦中的呋喃它酮藥物殘留。試劑盒中包括了所有檢測用的試劑。該試劑盒有96個(gè)試驗(yàn)孔包括標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，如果進(jìn)行定量分析，必須有微孔板酶標(biāo)儀。

樣品制備 轉(zhuǎn)移、提取、離心、濃縮和脫脂

檢測時(shí)間 （樣品制備以10個(gè)樣品為例）

第1天…….………….…大約2小時(shí)

過夜孵育…….…………大約16小時(shí)

第二天…….………….….大約2小時(shí)

檢測過程（與論樣品數(shù)量無關(guān)）大約1.5小時(shí)

檢測下限  …….………….…….…..大約200ppt

回收率

魚蝦…….………….…….…..大約90-

肉…….………….…….….. ….大約70-80%

蜂蜜…….………….…….…大約102-113%

交叉反應(yīng)     

呋喃唑酮…….………….…….….. …< 0.05%

硝基呋喃托英…….………….…….…< 0.05%

硝基糠腙（硝基呋喃腙）…….……..< 0.05%

注意

關(guān)于呋喃唑酮的檢測可以用ridascreen? nitrofuran（aoz）試劑盒，（產(chǎn)品編號(hào)r3701）

1. 用途

ridascreen? 呋喃它酮檢測試劑盒測定肉類（雞、豬、牛）和魚蝦中的呋喃它酮藥物殘留。

2.    概要

硝基呋喃類藥物是人工合成的廣譜抗生素，它有非常好的抗菌作用和藥動(dòng)力學(xué)的特性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用，作為豬、禽類和水產(chǎn)促生長的添加劑。但在長時(shí)間的實(shí)驗(yàn)室研究過程中發(fā)現(xiàn)，硝基呋喃類的藥物和代謝物均可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變和基因突變，正因?yàn)槿绱瞬艑?dǎo)致此類藥物禁止在治療和飼料中使用。硝基呋喃類藥物中呋喃它酮、硝基呋喃托英和硝基糠腙（硝基呋喃腙）在1993年被歐洲（eu）禁用，呋喃它酮在1995年也被禁用。

由于硝基呋喃類藥物在體內(nèi)很快就能被代謝，而在組織中結(jié)合的代謝產(chǎn)物則能存留較長的一段時(shí)間，所以在分析此類藥物的殘留時(shí)經(jīng)常要分析其代謝后的產(chǎn)物，管理部門就以檢測代謝產(chǎn)物為手段達(dá)到檢測硝基呋喃類殘留的目的。具體代謝產(chǎn)物見下表

呋喃唑酮
aoz

呋喃它酮
amoz

硝基呋喃托英
ahd

硝基糠腙（硝基呋喃腙）
sem

amoz的檢測是lc-uv，lc-ms和lc-ms/ms用來檢測呋喃它酮的Zui常用方法，酶聯(lián)免疫方法結(jié)合了色譜技術(shù)，采用amoz的特異性抗體，可以有很高的度，更靈敏的反應(yīng)，不高的技術(shù)要求和更短的檢測時(shí)間。用ridascreen?呋喃它酮酶聯(lián)免疫試劑盒可以測定肉類（雞、豬、牛）和魚蝦中的呋喃它酮藥物殘留。

3.    測定原理

測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)（雙抗體反應(yīng)）。微孔板包被有針對(duì)呋喃它酮抗體的抗體。加入呋喃它酮抗體，酶標(biāo)記物，標(biāo)準(zhǔn)或樣品溶液。游離呋喃它酮與酶標(biāo)記物競爭呋喃它酮抗體結(jié)合位點(diǎn)（競爭性酶免疫分析），同時(shí)呋喃它酮抗體也與微孔板上固定的抗體結(jié)合。沒有結(jié)合的酶標(biāo)記物在洗滌步驟中被除去。將酶基質(zhì)/發(fā)色劑加入到孔中并且孵育。結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處測量（選擇參比波長≥600nm）。吸光度值與樣品中的呋喃它酮濃度成反比。

4.    提供的試劑

每一個(gè)盒中的試劑足夠進(jìn)行96個(gè)測量（包括標(biāo)準(zhǔn)測定孔），盒中的材料如下

1 x 96孔板（12條 x 8孔）

6 x 呋喃它酮標(biāo)準(zhǔn)液，1. 3ml/瓶

0ppt，100ppt，300ppt，900ppt，2700ppt，8100ppt

1 x 酶標(biāo)記物（6ml）…….………….….…….…….…..紅色帽

1 x 呋喃它酮抗體液（6ml）…….……….…….….…..黑色帽

1 x 發(fā)色劑/基質(zhì)（10ml）…….………….….….….…..棕色帽

1 x 反應(yīng)終止液（14ml） 1n硫酸…….….….…….…..黃色帽

1 x 樣品及洗滌緩沖液粉劑：為10mm的磷酸鹽粉劑， ph7.4其中包括0.05%土溫20

5.    需要的材料但盒中不提供

5.1設(shè)備

----微孔板酶標(biāo)儀（450nm）

----離心機(jī)

----振蕩器

----旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器

----磁力攪拌器

----50ul，100ul，量加樣器

----多道移液器

----混合器（旋轉(zhuǎn)或超聲）

5.2試劑

----2-硝基苯甲醛（10mm，溶于二甲基亞砜中）

此溶液可以直接使用，如7.6mg 的 2-硝基苯甲醛溶于5ml 二甲基亞砜中

----0.1m k2hpo4

----正己烷（或正庚烷）

----乙酸乙酯

----1 m  hcl

----1 m  naoh

6. 操作者應(yīng)該注意之事項(xiàng)

----標(biāo)準(zhǔn)液含有呋喃它酮，應(yīng)特別小心

----反應(yīng)停止液為1m硫酸，避免接觸皮膚

----不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度的降低

----不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑

7. 儲(chǔ)存條件

----保存試劑盒于2-8oc（36-46℉），不要冷凍

----發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下

----將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑

    一起重新密封

8. 試劑變質(zhì)的跡象

紅色的發(fā)色試劑有藍(lán)色反應(yīng)，表明發(fā)色劑/基質(zhì)變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。

0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.6個(gè)單位（a450nm<0.6）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

9. 樣品處理

樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存

9.1蝦，肉樣（雞肉、豬肉和牛肉），肝臟，魚和蛋

----用均質(zhì)器均質(zhì)樣品

9.2 接上面的方法

----取1g的均質(zhì)物（魚蝦/肉樣）分別加入4ml的蒸餾水， 0.5ml 1m的hcl和100ul10mm的2-硝基苯甲醛，充分振蕩

----在37℃過夜孵育（大約16小時(shí)）

----分別加入5ml 0.1m k2hpo4，0.4ml 1m naoh和5ml的乙酸乙酯，劇烈振蕩30秒鐘

----在室溫下（20-25 oc/68-77℉）離心：3000g/10分鐘

----取出2.5ml的乙酸乙酯層到另一個(gè)容器中蒸干

----用1ml的正己烷（或正庚烷）溶解干燥物，用1ml的樣品稀釋液適當(dāng)?shù)幕旌?/p>

----在室溫下（20-25 oc/68-77℉）離心：3000g/10分鐘

----用50ul的下層液體進(jìn)行分析

9.3蜂蜜

----取1g的蜂蜜，放入容量為20-30ml的離心管中，分別加入5ml的己烷，100ul 5m的hcl（或500ul1m的hcl）和4ml的h2o，充分振蕩約1min

----室溫（20-25℃）3000g，離心10分鐘

----在—80℃冷凍30 min（或—20℃冷凍1h）

----除去上層

----在50℃水浴下，復(fù)溶冷凍層

----加200ul 10mm的2-硝基苯甲醛（溶于二甲基亞砜），充分振蕩

----在37℃過夜孵育（大約16小時(shí)）

----分別加入5ml 0.1m k2hpo4，0.4ml 1m naoh和5ml的乙酸乙酯，劇烈振蕩1min

----室溫（20-25℃）3000g離心10分鐘

----取2.5ml的乙酸乙酯層到另一個(gè)試管中，50-60 ℃氮?dú)饬飨抡舾?/p>

----用1ml的樣品稀釋液溶解干燥物，劇烈振蕩1min

----取50ul 進(jìn)行分析

稀釋倍數(shù)： 2

檢測下限： 300ppt

10. 酶標(biāo)免疫分析程序

10.1 測定之前注意事項(xiàng)

1.    使用之前將所有試劑回升至室溫20-25℃（68-77℉）。

2.    使用之后立即將所有試劑放回2-8℃（36-46℉）。

3.    在使用中不要讓微孔干燥。

4.   在eia分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細(xì)按照推薦的洗板順序操作是eia測定程序中的要點(diǎn)。

5.    在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋子蓋住微孔板。

10.2樣品洗滌緩沖液的制備

在試劑盒中提供一包樣品洗滌緩沖液的粉劑，一包粉劑溶解于1升的蒸餾水中，制備好的樣品洗滌緩沖液在2-8℃（36-46℉）下Zui多保存4周時(shí)間。

10.3包被有抗體的微孔板條

將錫箔袋回至室溫后，沿橫向邊壓封線外側(cè)剪開，取出需用數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板立即放回原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2-8℃。不要冷凍。

10.4測定程序

1.   將足夠標(biāo)準(zhǔn)和樣品所用數(shù)量的孔條插入微孔架，標(biāo)準(zhǔn)和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，記錄下標(biāo)準(zhǔn)和樣品的位置。

2.   加入50ul標(biāo)準(zhǔn)或處理好的樣品液到各自的微孔中，每個(gè)孔加入樣品或標(biāo)準(zhǔn)時(shí)注意更換移液器的吸頭。

3.    加入50ul酶標(biāo)記物溶液（紅帽）到每一個(gè)微孔底部，充分混合。

4.    加入50ul抗體溶液（黑帽）到每一個(gè)微孔底部充分混合，在室溫孵育1小時(shí)（20-25℃/68-77℉），覆蓋上薄膜（防止蒸發(fā)）。

5.   倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3次）以保證完全除去孔中的液體。用250ul樣品洗滌緩沖液充入孔中，再次倒掉微孔中液體，再重復(fù)兩次上述操作。

6.    加入100ul基質(zhì)/發(fā)色試劑到每一微孔中，充分混合并在室溫暗處孵育15分鐘。

7.   加入100ul反應(yīng)終止液到每一微孔中。混合好在450nm處測量吸光度值以空氣為空白，必須在加入停止液后60分鐘內(nèi)讀取光度值。

11. 結(jié)果

所獲得的標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸光度值的平均值除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值再乘以100，因此0標(biāo)準(zhǔn)等于，吸光度值以百分比表示。

標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值（或樣品）

-----------------------------x 100=  %吸光度比值

0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值

計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)的值并繪成一個(gè)以呋喃它酮濃度（ng/kg）為半對(duì)數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)的曲線圖，曲線在300-2700ng/kg（ppt）范圍內(nèi)基本趨近為直線，相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度（ng/kg）可以從校正曲線上讀出。

請(qǐng)注意

為了獲得樣品中的呋喃它酮的實(shí)際濃度（ng/kg），從校正曲線上讀出的濃度值必須乘以相對(duì)應(yīng)的稀釋系數(shù)，稀釋系數(shù)為2

12. 靈敏度

ridascreen?呋喃它酮試劑盒的平均檢測下限約為100ng/kg。根據(jù)樣品的前處理情況，可以得出樣品的檢測下限為200ng/kg。 

圖1：ridascreen?呋喃它酮試劑盒的回歸曲線

13. 特異性

ridascreen?呋喃它酮試劑盒的特異性通過對(duì)相應(yīng)的物質(zhì)進(jìn)行交叉反應(yīng)性分析而得到。

呋喃唑酮…….………….…….….. …..< 0.05%

硝基呋喃托英…….………….…….….< 0.05%

硝基糠腙（硝基呋喃腙）…….………< 0.05%

14. 再現(xiàn)性

由三個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出ridascreen?呋喃它酮試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%cv）對(duì)相應(yīng)呋喃它酮濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。