293T-spCas9細(xì)胞株-精品熟女少婦AV免費(fèi)觀看メイリン モデルコレクション メ,精品國(guó)產(chǎn)亞洲午夜精品AV
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貨號(hào)：C1203
培養(yǎng)基：MEM (含NEAA)(gibco貨號(hào)：41500083）高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清
消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA
凍存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO
培養(yǎng)條件：37℃，5% CO2
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
293T-spCas9細(xì)胞是用293T細(xì)胞構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)spCas9蛋白(C端有NLS信號(hào))的細(xì)胞株。在轉(zhuǎn)入sgRNA表達(dá)質(zhì)?；蛘呋瘜W(xué)合成的sgRNA后可以對(duì)細(xì)胞基因組DNA進(jìn)行定點(diǎn)切割。也可以配合驗(yàn)證載體pTYNE載體實(shí)現(xiàn)對(duì)基因敲除靶點(diǎn)的篩選和驗(yàn)證。
細(xì)胞特性：
表達(dá)基因：野生型spCas9，C端NLS信號(hào)
基因?qū)敕椒ǎ郝《?br>篩選抗生素：puromycin
細(xì)胞克?。?jiǎn)慰寺〖?xì)胞株
使用注意事項(xiàng)：
293T-spCas9細(xì)胞采用嘌呤霉素篩選得到，表達(dá)嘌呤霉素抗性基因，而HEK293T細(xì)胞本身對(duì)G418有較高抗性，因此后續(xù)細(xì)胞篩選實(shí)驗(yàn)中不能采用這兩種抗生素。
Cas9蛋白需要gRNA配合才能對(duì)定點(diǎn)切割細(xì)胞基因組。單獨(dú)使用不能發(fā)揮基因敲除或者編輯作用。配套的gRNA表達(dá)載體有pGR系列載體和pGR-EGFP系列載體。293T-spCas9細(xì)胞推薦用pGR-Hygro（貨號(hào)CR2013）和pGR-EGFP-Hygro（貨號(hào)CR2016）。
僅采用sgRNA表達(dá)載體對(duì)目標(biāo)基因切割，細(xì)胞一般通過NHEJ (非同源重組末端連接， nonhomologous end-joining)進(jìn)行修復(fù)，從而產(chǎn)生缺失突變。轉(zhuǎn)入gRNA表達(dá)載體的同時(shí)轉(zhuǎn)入同源重組的模板，可以通過同源重組實(shí)現(xiàn)基因突變或敲除。具體同源重組的設(shè)計(jì)和構(gòu)建以及陽(yáng)性細(xì)胞克隆篩選的方法請(qǐng)參照相關(guān)文獻(xiàn)。
細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：
293T-spCas9細(xì)胞對(duì)血清要求較高，采用高質(zhì)量胎牛血清進(jìn)行培養(yǎng)十分必要，我們采用GIBCO和HYCLONE的胎牛血清培養(yǎng)均能獲得滿意效果。切勿用新生牛血清或劣質(zhì)胎牛血清培養(yǎng)。
在細(xì)胞培養(yǎng)早期大量?jī)龃婕?xì)胞十分必要。
293T-spCas9細(xì)胞傳代培養(yǎng)中應(yīng)保證細(xì)胞密度不高于80%，低密度傳代對(duì)保持細(xì)胞狀態(tài)極為重要。
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293細(xì)胞株 , spCas9細(xì)胞株 , 細(xì)胞株
試劑盒，菌株，載體,
生物科技、計(jì)算機(jī)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓；銷售：生物試劑（不含危險(xiǎn)化學(xué)品、藥品及國(guó)家有專項(xiàng)規(guī)定的產(chǎn)品）、儀器儀表、塑料制品?！疽婪毥?jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)】
重慶英茂盛業(yè)生物科技有限公司致力于細(xì)胞基因編輯服務(wù)，我們提供細(xì)胞基因過表達(dá)服務(wù)；細(xì)胞RNAi基因敲減服務(wù)以及CRISPR基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)，并提供配套產(chǎn)品和服務(wù)。其中慢病毒、RNA干擾和穩(wěn)定細(xì)胞株篩選已經(jīng)形成一套成熟的體系。公司有著多年專業(yè)分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)成功為中科院、北京大學(xué)等知名研究院所以及多家制藥企業(yè)提供技術(shù)服務(wù)。 我們的宗旨是“提供最好的服務(wù)給客戶”。在此宗旨的指引下，我們始終堅(jiān)持高...