一、 原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)水產(chǎn)和雞肉等組織樣本中的AMOZ，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行的，樣本中的AMOZ和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗呋喃它酮代謝物的衍生物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的AMOZ含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出呋喃它酮代謝物含量。
二、 試劑盒技術(shù)指標(biāo)：
試劑盒靈敏度： 0.1 ppb
樣本檢測(cè)下限：
組織、蜂蜜 0.2ppb
魚(yú)/蝦等水產(chǎn)品組織因存在一定的干擾，檢測(cè)下限為0.3 ppb
回收率：
魚(yú)/蝦水產(chǎn)組織 90%±15%
蜂蜜/雞肉/肝臟樣本 80%±15%
交叉反應(yīng)率：
呋喃它酮代謝物
呋喃唑酮代謝物 ﹤0.1%
呋喃妥因代謝物 ﹤0.1%
呋喃西林代謝物 ﹤0.1%
三、試劑盒組成
1．微量測(cè)試孔：96T/8孔
2．標(biāo)準(zhǔn)品液： 0 ppb 0.1 ppb 0.3 ppb 0.9 ppb 2.7 ppb 8.1 ppb （1ml/瓶）
3．酶標(biāo)記物 12ml
4．抗體工作液 7ml
5．底物緩沖液 7 ml
6．底物液 7 ml
7．終止液 7 ml
8．20倍濃縮洗滌液 50ml
9．復(fù)溶液 50ml
10．15.1 mg衍生化試劑
四、 所用儀器、試劑
具備的儀器： 微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器： 單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道250μl
試 劑： 甲醇、氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、磷酸氫二鉀、鄰硝基苯甲醛、亞硝基鐵氰化鉀（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）ZnSO4·7H2O
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時(shí)，都必須注意：
（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本前處理需配制：
1．衍生化試劑 稱(chēng)15.1 mg鄰硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(濃度10 mM)
2．C液：（供奶樣用）稱(chēng)12.5 g亞硝基鐵氰化鉀用去離子水定溶至100 mL。
D液：（供奶樣用）稱(chēng)29.8 g硫酸鋅用去離子水溶解定溶至100 mL。
3．0.1 M K2HPO4 稱(chēng)22.8 gK2HPO4·3H2O
加去離子水溶解定溶至1 L
4．1M HCl取8.6 ml濃HCl加水定溶至100 mL。
5．1M NaOH稱(chēng)取4 g NaOH加水定溶至100 mL。
樣本的處理
(a) 肉樣或魚(yú)蝦
用均質(zhì)器均質(zhì)樣本，接（d）的描述方法
(b) 奶樣
1. 取出5 mL的奶樣本到玻璃離心管中，分別加入C液和D液各250 μL。
2. 用振蕩器充分混合樣本,用恒溫離心機(jī)4000 r/min以上離心10 min(4-12℃).若沒(méi)有恒溫離心機(jī),則先將樣本降溫至大約8 ℃，然后離心。
3. 接(d)的描述方法
(c) 蜂蜜
1. 取1±0.05 g樣本到離心管中。
2. 加入4 mL的去離子水溶解，再加入0.5 mL 1 M HCl和100 μL衍生化試劑,充分振蕩。
3. 接(d)第2步描述方法
(d)接上面的方法
1. 取1±0.05 g的均質(zhì)樣本(肉樣/魚(yú)蝦)、牛奶的離心上清液1.1 mL（相當(dāng)1 mL奶樣），分別加入4mL的去離子水，0.5 mL 1 M HCl和100 μL衍生化試劑，充分振蕩。
2. 置于56 ℃環(huán)境中孵育（2 h）。
3. 分別加入5 mL 0.1 M K2HPO4， 0.4 mL1 M NaOH和5 mL的乙酸乙酯，充分振蕩30s。
4. 在室溫下（20-25 ℃）4000 r/min以上離心10 min。
5. 取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一潔凈容器中于50 ℃氮?dú)?空氣吹干。
6. 用1mL正己烷溶解干燥物，用1mL已稀釋好的復(fù)溶液充分混合；在室溫下（20-25 ℃）4000 r/min以上離心10min。
7. 取50μl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：2