GUS染色液（即用型）

貨號：RS4200

有效期：6個月

產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品說明：

GUS（β-Galactosidase）基因是存在于E.coli等一些細菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶，該基因常作為融合標記用于植物轉(zhuǎn)基因分析和調(diào)控研究中。GUS受體基因系統(tǒng)有表達E.coliGUS酶的穩(wěn)定性和在植物內(nèi)的低活性，絕大多數(shù)植物沒有檢測到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯類物質(zhì)為底物，其反應產(chǎn)物可用多種方法檢測出來。5-Bromo-chloro-3-indolylβ-D-glucuronide，cyclohexylammoniumsalt(簡稱為X-Gluc或X-GlcA)分子量為521.8，CAS號為18656-96-7，是檢測大腸桿菌中GUS基因的底物，可快速檢測植物中GUS基因融合標記。

GUS染色液(即用型)又稱β-葡萄糖苷酶基因染色試劑盒(β-Galactosidase Reporter GeneStaining Kit)簡稱為GUS染色液，其染色原理是適宜的反應條件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍色物質(zhì)，該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細胞核組織中的靛藍物質(zhì)，具有GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點，可用肉眼或顯微鏡觀察到，GUS染色液可用于生物化學活性分析、免疫分析以及組織和細胞的組織化學染色，多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達分析，該即用型試劑比常規(guī)GUS染色液操作簡便。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、 70%乙醇

2、 去離子水

3、 小瓶或多孔板、顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

1、 配制X-Gluc溶液(50x)：

20ml體積：取400ul X-GlucSolution完全融化后加至1支X-Gluc中，充分溶解，即獲得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x) -20℃保存，1個月有效。

50ml/100ml體積：取1ml X-Gluc Solution完全融化后加至1支X-Gluc中，充分溶解，即獲得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x) -20℃保存，1個月有效。

500ml體積：取2ml X-GlucSolution完全融化后加至1支X-Gluc中，充分溶解，即獲得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x) -20℃保存，1個月有效。

2、 配制X-Gluc 染色液：取適量X-GlucSolution(50×)和GUS Buffer，按1:49比例充分混勻，配制成X- Gluc 染色液，如取200ul X-GlucSolution(50×)加入到9.8ml GUS Buffer中，即配成10ml GUS染色液，該染色液**現(xiàn)配現(xiàn)用，短期可4℃保存3d。

3、 取適量待染液片等組織加入適量GUS染色液，使GUS染色液完全浸沒組織。

4、 37℃孵育1-24h。隨著孵育時間的延長，藍色漸漸出現(xiàn)，當表達量較高時，GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點。

5、 用70%乙醇脫去樣本的葉綠素，一般樣本浸沒于乙醇1-3h，至陰性對照呈白色。如有必要可重復該脫色步驟，以便徹底清除葉綠素。樣本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光學顯微鏡下觀察，白色背景上的藍色即為GUS表達位點。

注意事項：

1、 GUS染色液一般冰上配制，可以4℃避光保存3天。

2、 X-GlucSolution(50×)應避免反復凍融，否則染色效率會下降。

3、 由于組織特異性等原因，藍色顏色反應可能不完全一致，應注意摸索具體實驗條件。

4、 擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片（1-3mm）。

5、 當操作大的組織和樣品時，可以選用真空滲入法來幫助底物滲入細胞，建議使用GUS染色液（RS2400）。

6、 GUS染色液(即用型)染色靈敏度較好，但有時會出現(xiàn)非特異性反應(即假陽性)，如非特異性反應較明顯，建議采購常規(guī)GUS染色液（RS2400）。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。