Gα13活化試驗(yàn)。MEF細(xì)胞分別用LPA（第2道）或不加LPA（1道）處理。細(xì)胞裂解物用抗活性Gα13單克l隆抗l體（Cat）孵育。#26902）（頂面板）。這個(gè)用抗Gα13兔多克l隆抗l體（Cat）免l疫印跡法檢測(cè)沉淀活性Gα13#21005年）。底部的面板顯示了用抗Gα13的細(xì)胞裂解物的Westernblot（5%在頂部面板中使用的）。

Arf樣蛋白1（Arl1）是GTpases的Ras超家族中的調(diào)控性GTPasesArf家族的成員，并且在整個(gè)真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1對(duì)果蠅和秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng)的早期胚胎發(fā)育至關(guān)重要。Arl1在主要序列，細(xì)胞定位和功能（膜運(yùn)輸調(diào)節(jié)）上與Arf1-6較相似，Rac1 kit，甚至共享幾個(gè)共同的結(jié)合伴侶。除了其在高爾基體/反式高爾基體網(wǎng)絡(luò)中的膜運(yùn)輸功能中，還有報(bào)道表明Arl1在酵母中的離子穩(wěn)態(tài)中可能發(fā)揮作用。

Arf6激l活測(cè)定。 經(jīng)GDP（lane1）或GTPγS（lane 2）處理后，純化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。用抗活性Arf6單克l隆抗l體進(jìn)行免l疫沉淀。

陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的體外GTPγS/ GDP蛋白質(zhì)上樣量

注意：體內(nèi)細(xì)胞刺激將激l活可用Arf 6的大約10％，而體外GTPγS蛋白負(fù)載將激l活A(yù)rf 6的將近90％。

1，將0.5 ml每種細(xì)胞提取物等分到兩個(gè)微量離心管中（或使用1 μg純化的Arf 6蛋白）。

2，向每個(gè)試管中加入20 μl 0.5 M EDTA（終濃度為20 mM）。

3，將5 μl 100 XGTPγS（至100 μM，終濃度）加到一個(gè)試管中（陽(yáng)性對(duì)照）。

4，在第二個(gè)試管中加入5 μl 100 X GDP（至1 mM，終濃度）（陰性對(duì)照）。

5，在攪拌下將試管在30°C孵育30分鐘。

6，通過(guò)將試管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2（至60 mM，終濃度）來(lái)停止加載。

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