如何高效的裝層析柱-嗯大JB插我好深視頻|人妻免費(fèi)視頻公開上傳
柱層析是世界各地實(shí)驗(yàn)室中常用的純化技術(shù)。如果做得好，它可以簡單快速地從混合物中分離出所需的化合物。但是，與許多化學(xué)實(shí)踐一樣，快速有效地設(shè)置和運(yùn)行色譜柱可能需要數(shù)年才能掌握。在這里，小編將提供了一些柱層析的小tips和技巧，對柱層析過程中常遇到的一些問題進(jìn)行故障排除并給出替代方案。
裝柱：
裝柱子（添硅膠）時，常用的有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法，硅膠（稱為固定相更為廣義）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右（長度沒有之說，根據(jù)自身情況而定，制備的大柱可以長達(dá)一米），太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴(kuò)散或拖尾導(dǎo)致分離效果不好。濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓（土方法可以用養(yǎng)魚的氧氣泵加壓或是用氮?dú)?，?dāng)然不加壓也可以）用淋洗劑"走柱子"，本法大的優(yōu)點(diǎn)是一般柱子裝的比較結(jié)實(shí)，沒有氣泡。
干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)（濕法也要敲的，效果好點(diǎn)），至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結(jié)實(shí)（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。接著是用淋洗劑"走柱子"，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但大的缺陷在于"走柱子"時，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺到）（梯度洗脫時，濕法裝柱也會出現(xiàn)該情況，比較不好處理，可以緩慢改變?nèi)軇?，且置于通風(fēng)處），容易產(chǎn)生氣泡，這一點(diǎn)在使用低沸點(diǎn)的淋洗劑時如乙 醚（用乙 - 醚明顯），二氯甲烷更為明顯。雖然產(chǎn)生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時候，氣泡就會釋放出來，嚴(yán)重時，整個柱子變花，樣品不可能平整地通過，當(dāng)然也就談不上分離了。解決的辦法是：
、硅膠一定要壓結(jié)實(shí)；
第二、 一定要用較多的溶劑"走柱子"，一定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。
也有介紹在硅膠的上層填上一小層石英砂(我一般墊張濾紙，撒上石英砂，再放些棉花)，防止添加溶劑的時候，使得樣品層不再整齊。但我的感覺是如果小心上樣，添加溶劑，則沒有這個必要。
濕法上樣1. 將樣品溶解在少量的溶劑中（5-10滴）。此處允許使用比洗脫溶劑稍微更極性的溶劑。如果您需要使用二氯甲烷或更強(qiáng)的溶劑，可能優(yōu)選下述干法上樣方法。2. 使用注射器或吸管將樣品直接滴到硅膠的頂部。盡量不要擾動硅膠表面，理想情況下，樣品應(yīng)在表面上均勻分布，以便形成薄的水平帶。3. 添加完整個樣品后，讓色譜柱排出，使溶劑水平接觸二氧化硅頂部。4. 小心地添加一層沙子（約2-5毫米）。這將有助于防止二氧化硅表面因添加更多溶劑而受到干擾。5. 使用移液器小心添加更多溶劑，使溶劑水平高于沙子頂部約10 mm。6. 讓這種溶劑排出，直至溶劑水平高于砂子頂部約1-2毫米。7. 重復(fù)步驟5和6一次或兩次。這將確保您的樣品被吸收到二氧化硅上。8. 后，根據(jù)需要添加盡可能多的溶劑，然后就可以開始運(yùn)行列了。
如果您的化合物在溶劑系統(tǒng)中溶解度較差可以將樣品干燥加載到色譜柱上。
干法上樣1. 將樣品溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，并將其轉(zhuǎn)移到圓底燒瓶中。2. 向溶解的樣品中加入干硅膠（約為樣品質(zhì)量的10-20倍）。3. 輕輕攪拌混勻，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)溶劑，直至二氧化硅干燥且能夠自由流動。如果它仍然是油，則需要添加更多的硅膠并重復(fù)該過程。4. 小心地將溶劑添加到色譜柱中，使溶劑水平高于硅膠頂部2-3厘米。使用移液器確保二氧化硅表面不受干擾。5. 將干燥后的樣品硅膠倒入色譜柱中，使其沉降。確保溶劑水平始終保持在二氧化硅頂部之上且不存在氣泡。好的方法是慢慢加入。6. 按照上述濕法上樣的步驟4-8，將樣品完全吸收到色譜柱上。
收集餾分：
在組分流出之前存在一定的死體積，死體積的大小取決于柱子的大小和分離的化合物，可在色譜柱上標(biāo)記起始溶劑水平和下方對應(yīng)二氧化硅長度的標(biāo)記（圖2）。一旦溶劑水平降至第二個標(biāo)記以下，就可以開始收集餾分。